Las nuevas técnicas desarrolladas para el diagnóstico de salmonelosis en aves incluyen una gran variedad de sistemas y procesos que han logrado determinar con precisión las especies implicadas en las infecciones por salmonella y la diferenciación entre cepas de campo y cepas vacunales.
Existen sistemas semiautomatizados, kits basados en características bioquímicas y en las sensibilidades/resistencias a determinados antibióticos, técnicas inmunológicas, métodos serológicos, etc. Dentro de todas ellas, sobre las que se está trabajando con mayor intensidad, debido a su gran potencial para superar las limitaciones de las técnicas tradicionales, son las denominadas técnicas de biología molecular, destacando principalmente las basadas en la reacción en cadena de la polimerasa, conocida como PCR por sus siglas en inglés.
La salmonelosis es una de las zoonosis que mayor impacto tiene en la salud humana provocando procesos gastrointestinales que pueden ser de diferente gravedad, pudiendo llegar a ocasionar problemas severos en las personas infectadas. La infección se suele producir por el consumo de alimentos de origen animal y en especial por el consumo de huevos y carne de ave contaminada y con un inadecuado tratamiento culinario.
Para disminuir lo máximo posible la prevalencia de la salmonelosis en aves, y con ello la posterior transmisión a las personas, la Unión Europea estableció unas pautas para el control de la enfermedad que posteriormente dieron lugar a los Programas Nacionales de Control de Salmonella (PNCS) donde se indican todas las medidas encaminadas a reducir la Salmonella en aves.
Dentro de las medidas de profilaxis incluidas en estos programas destaca la vacunación de las gallinas ponedoras. Esta vacunación se implementaba inicialmente durante el periodo de recría, pero a partir de este año, gracias a la autorización concedida por las Agencias Europeas del Medicamento, también se ha autorizado el uso de la vacuna Primun Salmonella E de Calier durante el periodo de puesta. Se trata de una vacuna viva atenuada de salmonella enteritidis, que es la más importante de las cepas de salmonella que infectan a las gallinas ponedoras y reproductoras, y con cuya aplicación a través del agua de bebida en las granjas se consigue la inmunización de los animales.
Actualmente, el diagnóstico de salmonella en aves se realiza a través una metodología basada en la norma ISO 6579 y que consiste en el análisis de las diversas muestras utilizando distintos medios de cultivo que nos permiten el aislamiento y posterior identificación de la cepa de salmonella. Este procedimiento analítico presenta varias limitaciones:
- La necesidad de contar con varios días para completar todo el proceso.
- Los resultados que se ofrecen son puramente cualitativos, sin posibilidad de trabajar en el plano cuantitativo.
Para hacer frente a estos inconvenientes, en los últimos años se está poniendo el foco en el desarrollo de técnicas alternativas que ofrezcan resultados en un menor periodo de tiempo y que además permitan realizar una cuantificación que mejore la fiabilidad del análisis y la toma de decisiones.
Además de detectar la presencia de salmonella en las distintas muestras que se analizan, y teniendo en cuenta que se realiza la vacunación de los animales frente a la salmonelosis en aves, un aspecto muy necesario de las técnicas analíticas es que nos permitan diferenciar entre cepas salvajes o de campo y cepas vacunales. Esto es muy importante porque en el caso de muestras positivas a Salmonella en poco tiempo podríamos saber si te trata de una cepa patógena o la que está en la vacuna correspondiente.
El diagnóstico por PCR ofrece numerosas ventajas con respecto a otras técnicas, entre las que destacan principalmente:
- Una mayor sensibilidad (pudiendo diferenciar a nivel molecular entre distintas cepas bacterianas)
- Mayor rapidez en la obtención de resultados, aspecto muy importante sobre todo para llevar a cabo acciones de gran repercusión dentro de las granjas en las que se toman muestras dentro de los Programas Nacionales de Control de Salmonella.
Las técnicas de PCR han ido evolucionando desde la PCR tradicional hasta la PCR en tiemop real o RT (Real Time). La PCR a tiempo real es la más usada actualmente para diagnóstico de numerosas enfermedades importantes en sanidad animal. A diferencia de la tradicional -en la cual se trabaja únicamente en el plano cualitativo y además es necesario acoplar otras técnicas para la obtención de resultados (como por ejemplo la electroforesis)- la PCR a tiempo real permite el seguimiento continuo y la cuantificación de datos, sin ningún tratamiento posterior.
Una de las aplicaciones principales de esta técnica en el diagnóstico de la salmonelosis en aves es la posibilidad de distinguir entre las cepas presentes en las diferentes vacunas autorizadas como la vacuna de Calier Primun Salmonella E frente a salmonella enteritidis y las cepas de campo. Basados en esta tecnología se están desarrollando distintos test de diagnóstico DIVA (Differentiating Infected from Vaccinated Animals) que además de esta diferenciación entre cepas vacunales y de campo, también nos permite realizar controles de la excreción de las cepas vacunales, así como detectar su presencia en distintos tipos de muestras. Todo esto es de gran ayuda para hacer seguimientos de las vacunaciones realizadas en las granjas.
El continuo avance y desarrollo de estas técnicas de biología molecular va a proporcionar herramientas que van a ser de mucha ayuda en todo lo relacionado con el diagnóstico de salmonelosis en aves, así como en otras patologías importantes en avicultura.
Gel de electroforesis-PCR tradicional
PCR tiempo real (RT-PCR)
Calier trabaja precisamente en el desarrollo de estas técnicas de diagnóstico. La técnica en sí misma, así como la utilización de formatos de transporte (tarjetas FTA) van a permitir agilizar el diagnóstico y utilizar técnicas de la máxima precisión tanto para la identificación de las especies de Salmonella como para la diferenciación entre cepas vacunales y cepas de campo.
La posibilidad de diferenciación está acorde con las directivas expresadas en los programas nacionales de control de salmonella que exigen que las vacunas atenuadas dispongan de un método adecuado para diferenciarse bacteriológicamente.